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藥廠凈化車間沉降菌測試標準操作規程
1、菌落：細菌培養后，由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡稱CFU。通常用個數表示。
2、測試方法：沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經48小時以上培養，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數，來評定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定凈化車間的潔凈度。
3、所用的儀器和設備
1）高壓消毒鍋：使用時參照文件GZ-ZL-SOP-066-00進行操作。
2）恒溫培養箱：必須定期對培養箱的溫度計進行檢定。
3）培養皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養皿。使用前將培養皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。
4、培養基
普通營養瓊脂培養基。將培養基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養基注入培養皿，每皿約15m1。待瓊脂培養基凝固后，將培養基平皿放入30～35℃恒溫培養箱中培養數小時，若培養基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養基平皿應在2～8℃的環境中存放。
5、測試步驟
1）采樣方法：將已制備好的培養皿放置在預先確定的取樣點，打開培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5小時，再將培養皿蓋上蓋后倒置。
2）培養，時間不少于48小時。每批培養基應有對照試驗，檢查培養基本身是否污染，可每批選定3只培養皿作對照培養。
3）菌落計數：用肉眼直接計數，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數。
6、注意事項
1）測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
2）采取一切措施防止人為對樣本的污染。
3）對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。
4）由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。
5）采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或污染的應剔除。
7、測試規則
1）測試狀態
（1）沉降菌測試前：被測試凈化車間（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、必須控制在規定值內。被測試凈化車間（區）已消毒。
（2）測試狀態有靜態和動態兩種，并在報告中注明測試狀態。
（3）測試人員：測試人員必須穿戴符合環境潔凈度級別的工作服。靜態測試時，室內測試人員不得多于2個人。
2）測試時間
（1）對單向流，如100級凈化房間內及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開始。
（2）對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘開始。
8、沉降菌計數
1）最少采樣點數目：可按表1確定。在滿足最少測點數的同時，還宜滿足最少培養皿數，見表2。
表1最少采樣點數目
|
面積(m2) |
潔凈度級別 |
|||
|
|
100 |
10000 |
100000 |
300000 |
|
＜10 |
2～3 |
2 |
2 |
2 |
|
≥10～＜20 |
4 |
2 |
2 |
2 |
|
≥20～＜40 |
8 |
2 |
2 |
2 |
|
≥40～＜100 |
16 |
4 |
2 |
2 |
|
≥100～＜200 |
40 |
10 |
3 |
3 |
注：表中的面積對于單向流凈化車間是指送風面積，對于非單向流凈化車間是指房間面積。
表2最少培養皿數
|
潔凈度級別 |
所需Φ90mm培養皿數（以沉降0.5小時計） |
|
100 |
14 |
|
10000 |
2 |
|
100000 |
2 |
|
300000 |
2 |
2）采樣點的布置：工作區測試點位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點，采樣點的布置應力求均勻，避免采樣點在某 局部區域過于集中，某局部區域過于稀疏。
3）記錄：測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態及測試數據。
4）結果計算：用計數方法得出各個培養皿的菌落數。
平均菌落數的計算見下式：m1+m2+……+mn
平均菌落數m=n
式中：m為平均菌落數；m1為1號培養皿菌落數；m2為2號培養皿菌落數；mn為n號培養皿菌落數；n為培養皿總數。
5）結果評定：用平均菌落數判斷凈化車間的空氣中的微生物。
6）凈化車間（區）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準（見表3）。
表3
|
潔凈級別 |
100級 |
10000級 |
100000級 |
300000級 |
|
標準（平均） |
1個/皿 |
3個/皿 |
10個/皿 |
15個/皿 |
7）若某凈化車間（區）的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結果必須合格。
主要參考文獻：國家標準GB/T 16294-1996
